对于工业发酵菌种肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumoniae ), 研究发现有两种消除其重组型质粒的有效方法,一种是连续传代培养,另一种是使用消除剂十二烷基硫酸钠(SDS)。对K. pneumoniae重组菌连续20代传代培养后,发现其质粒具有较高的消除率;而以0.2% SDS复合Ca2+处理K. pneumoniae重组菌,也能有效消除其重组型质粒,且该方法省却了反复的传代培养,能快速得到质粒消除菌,更具简便易操作性。消除了质粒的K. pneumoniae能再次接纳新的质粒,有效避免了因质粒不相容性带来的转化不成功,进而可用作宿主菌积累更多的生理性状。
以引入了 His-tag 做标记的超嗜热菌 Thermococcus profundus 色素依存性 L-脯氨酸脱氢酶基因片段为目的基因,在宿主大肠杆菌 Rosetta-gami (DE3) Competent Cells 中表达目的蛋白。细胞培养液经超声菌体破碎、热处理、Ni Sepharose 层析分离,得到纯度较高的 His-tag 色素依存性 L-脯氨酸脱氢酶,比酶活是纯化前的 5 倍。纯化后的酶液经凝胶电泳分离得到片段为 58600, 40200, 22300 的 3 段短肽。通过对该酶性质的初步探索,得出在温度50 ℃,体系pH8.0,300 mmol/L Tris 缓冲溶液的条件下, L-脯氨酸脱氢酶酶活最高,为1.5 U/mL。